常见问题解答

位置:首页 > 技术支持 > 常见问题解答

快捷通道

一、收到原代培养的细胞后应该有哪些注意事项?

显微镜下观察细胞状态,看是否有细胞脱落、漏液和污染等异常情况,然后仔细阅读产品说明书,因不同品牌、不同种属、不同类型的细胞其培养技巧存在些许差别,户收到细胞后,请务必仔细阅读随货附赠的说明书,切记不可仅凭经验操作。

通常,我们可以从说明书中获取以下重要信息:

(1)细胞数目

(2)细胞增殖能力

(3)推荐培养基、培养器皿及包被液

(4)推荐接种密度

(5)复苏、培养、传代等操作步骤

(6)运输、储存及培养条件

二、细胞培养操作说明

收货处理

1. 贴壁细胞

发货形式:T25方瓶、冻存管

1. 1) 收到T25方瓶细胞后,拆开T25方瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精后请在显微镜下确认细胞生长状态(可以拍下此时细胞照片)。去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,然后再处理细胞。首先将T25方瓶中的培养基取出装在两个50ml离心管中备用,然后消化传代。检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们(冻存管细胞收到后直接37℃水浴复苏或直接放置于液氮中长期储存)。

2. 2) 冻存管细胞,收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。

2、悬浮细胞

收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将细胞置于中37培养箱℃平衡约2-3h。然后,1200rpm离心5min,弃去15ml离心管中的培养基,细胞沉淀用新鲜的完全培养基重悬并培养。

细胞的培养及传代

1、细胞培养

正确的培养基90%;优质胎牛血清10%。

培养条件: 温度37℃,CO2,5%。,培养箱湿度为70%-80%。极少部分细胞培养条件不一致,请仔细阅读对应的细胞说明书,使用正确的培养方式。

冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2、细胞传代

如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代。

1.  贴壁细胞的传代

(1) 弃去培养瓶中的培养基,用不含钙、镁离子的PBS浸洗皿/瓶底所有部位的细胞1-2次。

(2) 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,轻轻晃动培养瓶,置于37℃培养箱中消化2-3分钟。

(3) 2-3分钟后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。若细胞仍在贴壁,放回培养箱中继续消化至细胞大部分变圆脱落为止。

(4) 轻轻吹打培养瓶底,然后将瓶中的培养基吸出,移入15ml离心管中,在1200RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。

(5) 均分到几个到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中,放回培养箱培养。

细胞冻存

细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-4步骤进行,最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。

细胞复苏

1)将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻融化。

2)移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基重悬细胞。

3)将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中入培养箱培养。第二天换液并检查细胞密度。

三、原代细胞的传代周期和传代次数怎样确定?

原代细胞一般是采用“倍增次数”来描述细胞生长潜能的,一次细胞倍增是指细胞总数增长为原来的2倍,一次传代通常是指将一瓶细胞扩增至2-3瓶。由于不同物种、组织来源、细胞类型和体外培养条件等因素的影响,原代细胞“倍增次数”可能会有很大差异,所以对某些原代细胞的传代周期和传代次数需进行具体分析。

四、欣润生物的原代细胞,是否需要特定的包被液包被培养瓶/皿?

欣润生物的大多数细胞可以在不使用包被液的情况下自行贴壁。然而仍有部分细胞类型需要使用指定的包被材料。具体情况请参见说明书中相应部分的内容。

五、如何计算大鼠胰岛的IEQ值?

一般情况下,直径大小为150um 的胰岛细胞 = 1 IEQ.

胰岛 IEQ 对照表:

 

直径大小(um)

IEQ值

50-100

0.17

101-150

0.67

151-200

1.7

201-250

3.5

251-300

6.3

301-350

10.4

351-400

15.8

>400

22.7

 

显微镜下记录细胞大小和数量后,请按以上对照表计算,再乘以稀释倍数就是总的IEQ值。

例如:您从3ml细胞悬液中取出50ul,观察计数后得出:

        50-100 um 有5个胰岛

        101-150 um 有3个胰岛

        151-200 um 有2个胰岛

        201-250 um 有4个胰岛

那么总的IEQ值=60×(0.17×5+0.67×3+1.7×2+3.5×4)=1215.6 IEQ